药学论文：黄连配方颗粒制备工艺及质量研究

引 言

随着我国经济的高速发展，中医药产业保持了良好的发展势头[1]。中药配方颗粒作为一种新兴中药饮片形式，2001 年被纳入中药饮片管理。中药配方颗粒与传统煎剂相比，配方颗粒既能满足中医辨证论治的要求，并且质量稳定，同时又具有方便、快捷的特点，在临床实践中得到了越来越广泛的应用[2]。中药配方颗粒市场发展迅速，持续扩容，销售量逐年增加[3]，2012 年全国销售额达 30 亿元人民币，2013 年达 50 亿元人民币，2014 年达 70 多亿元人民币，每年以 40%以上的速度递增，成为中药饮片行业发展的新助力。黄连来源于毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch. )、三角叶黄连(Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsia)和云连(Coptis teeta Wal1. )，作为常用的中药，最早在《神农本草经》中便有记载，因其根茎呈连珠状而色黄，所以称之为“黄连”。具有清热燥湿、泄火解毒功效，临床应用广泛。

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第一部分黄连配方颗粒制备工艺优选

前 言

黄连在《神农本草经》、《本草纲目》和《本草经集注》等古典经籍中均有记载。《本草经疏》云，黄连禀天地清寒之气以生，故气味苦寒而无毒。味厚于气，味苦而厚，阴也。宜其下泄，欲使上行须加引导。入手少阴、阳明，足少阳、厥阴，足阳明、太阴。为病酒之仙药，滞下之神草。六经所至，各有殊功。其主热气，目痛眦伤泪出，明目，大惊益胆者，凉心清肝胆也。肠澼腹痛下痢。现代药理研究表明[4]，黄连具有抗病菌、抗真菌、抗病毒、抗米巴作用作用，抗炎抗腹泻作用，解热作用，对心血管作用等，是临床常用中药。但是传统汤剂已经不能适应现代快节奏生活，不易携带和保存，不便于大规模生产，不能满足人们对现代药物的要求。因此在中医理论为指导，以传统汤剂为基础，利用现代制药技术，优化工艺参数，制成安全、均一、有效、可控的现代中药饮片[5]很有必要。

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材料与方法

1 材料与仪器

1.1 材料

黄连药材购自安国路路通中药饮片有限公司，全检符合中国药典规定。

盐酸小檗碱对照品（批号 10713-200208，中国药品生物制品检定所（供含量测定用）

甲醇，色谱纯乙腈等，色谱纯

微孔滤膜（孔径 0.45μm），天津津腾实验设备有限公司

1.2 仪器

HC·TP 11B·10 药物天平，北京医用天平厂

AT201 梅特勒-托利多天平

Agilent 1100 型安捷伦高效液相色谱仪

水分快速测定仪，北京东方德科技有限公司

PGL-B 喷雾制粒干燥机，常州邦华干燥设备有限公司

2 方法

2.1 工艺选择依据

古典经籍记载黄连组方多以汤剂口服为主。中药配方颗粒作为一种新兴的中药饮片形式，应最大限度传承传统汤剂性味和功能，适应临床辨证论治的需要。因此工艺尊重传统，以传统汤剂为基础，保留继承历史，借用现代制药技术，发扬创新[6-7]。因此本工艺采用水提、浓缩和制粒工艺。

2.2 水提取工艺优选

2.2.1 单因素方差分析试验设计

传统汤剂煎煮方法多加 8-10 倍水，煎煮两次。因此将提取工艺设计为煎煮两次，加水量为 8 倍，将煎煮时间作为考察因素，以小檗碱含量作为考察指标进行试验。

2.2.2 样品提取

称取选净的黄连 300g，按照煎煮时间 0.5h、1h、1.5h 分别加水煎煮两次，煎液合并，滤过，真空浓缩，转移至 1000ml 的容量瓶中，备用。

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第二部分 黄连配方颗粒质量研究前言………………………………19

材料与方法……………………………………………………………19

结果……………………………………………………………………22

附图……………………………………………………………………24

附表……………………………………………………………………26

讨论……………………………………………………………………29

小结……………………………………………………………………29

参考文献………………………………………………………………30

结论…………………………………………………………………………31

第二部分黄连配方颗粒质量研究

前 言

通过对黄连配方颗粒提取工艺、喷雾干燥工艺的研究，确定了此产品稳定的制备工艺。为了有效控制黄连配方颗粒质量，本研究根据实际情况对成品进行了定性及定量研究，进行了薄层色谱研究，最终制定了黄连配方颗粒的定性鉴别方法；利用高效液相色谱技术，采用一测多评方法，制定了黄连配方颗粒含量测定方法并完成了方法学考察。

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结 果

1 薄层色谱鉴别结果

薄层色谱显示，黄连配方颗粒供试品色谱与对照品色谱相应位置上有相同颜色的荧光斑点，与对照药材色谱相应位置上有相同颜色的荧光主斑点。结果见 Fig.1。

2 含量测定考察结果

2.1 提取溶剂

根据实验结果甲醇-盐酸（100:1）对盐酸小檗碱的提取效果明显高于100%、70%、50%甲醇的提取效果，所以选择甲醇-盐酸（100:1）为提取溶媒。结果见 Table 1。

2.2 超声时间考察结果

超声时间分别为 10、20、30 分钟根据样品中小檗碱含量，表明超声10 分钟时小檗碱已被提取完全，因此选择 10 分钟进行超声提取，结果见Table

2。2.3 专属性

阴性样品溶液色谱图中未检出盐酸小檗碱吸收峰，阴性无干扰，表明该方法的专属性良好。色谱图见 Fig.2。

2.4 线性关系

结果表明盐酸小檗碱进样量在 0.0805-0.5632ug 范围内线性关系良好，回归方程为：Y = 6.0460x106X + 6.087x103，r =0.9999。试验数据见 Table3，标准曲线见 Fig.3。

2.5 精密度试验结果

盐酸小檗碱对照品连续进样 6 针，峰面积稳定，RSD 值为 1.97%，RSD 小于 2%，说明仪器精密度良好，试验结果见 Table 4。

2.6 稳定性试验结果

供试品溶液在 12h 内检测，峰面积稳定，峰面积 RSD=1.01%（n=6），RSD 小于 2%，结果表明，供试品溶液在 12h 内稳定，试验结果见 Table 5。

2.7 重复性试验结果

供试品溶液小檗碱含量 RSD=1.65%，RSD 小于 2%，表明该方法重复性良好，试验结果见 Table 6。

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讨 论

本文对黄连配方颗粒进行了含量测定研究。黄连的化学成分主要为生物碱类化合物，包括有小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、表小檗碱等。目前已有薄层扫描法、高效液相色谱法、胶束色谱法和高效毛细管电泳法等用于黄连生物碱的测定，其中高效液相色谱法测定结果准确、灵敏度高，且仪器普及率高，已成为黄连生物碱测定的主流方法。本研究采用高效液相色谱法测定黄连生物碱含量，参考《中国药典》2010 年版一部黄连药材项下的含量测定方法制订。通过对其方法学的考察，最终确定了黄连配方颗粒的含量测定方法。结果表明，该方法分离效果好、灵敏度高、重现性好，因此将该方法列入质量标准正文。

本文采用 TLC 法对黄连配方颗粒进行薄层色谱鉴别；采用 HPLC 一测多评法对黄连配方颗粒主要生物碱成分的含量进行了测定，通过三批中试样品的测定，制定了含量限度，研究结果表明，该法准确、灵敏、省时、重复性好，能够有效控制黄连配方颗粒的质量。

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结 论

本课题通过单因素方差分析试验设计，以小檗碱为考察指标，优选出水煎煮工艺；对影响喷雾制粒效果的主要参数进行了考察，优选出最佳的喷雾制粒工艺。质量研究中建立了黄连配方颗粒的薄层鉴别方法， 基于HPLC 法采用盐酸小檗碱一标多测法标定了小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱的含量，该方法专属性强、准确度高、重现性好。

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参考文献（略）